Пэтч-кламп регистрация при неплотном контакте

Метод регистрации от целой клетки в условиях плотного контакта позволяет регистрировать ионные токи, протекающие через небольшие мембранные фрагменты, которые содержат только один или несколько ионных каналов. Для получения информации о кинетике работы каналов или о плотности токов через мембрану проводится одновременная регистрация работы множественных каналов с использованием метода пэтч-кламп или применяется классический метод фиксации мембранного потенциала.

Регистрация при неплотном контакте по сути идентична регистрации одиночных каналов, за исключением того, что участок мембраны, на котором фиксируется потенциал, на 3 порядка больше, и при этом не требуется формирования гигаомных контактов.

Метод позволяет без труда получать стабильные электрофизиологические данные от локальных участков мембраны, используя интактные клетки практически без их изоляции или других видов обработки. Например, можно проводить измерения на целой мышце, не выделяя одиночные клетки. Отпадает необходимость и в использовании внутриклеточных микроэлектродов.

Однако, необходимо отметить, что наиболее корректную информацию о мембранной проводимости всё-таки даёт регистрация токов через одиночные каналы, так как позволяет избавиться от ряда артефактов, которые могут быть получены при регистрации макроскопического тока. Имеются, по крайней мере, четыре основные проблемы, с которыми приходится сталкиваться при регистрации макроскопических токов. Во-первых, трудно создать условия для регистрации тока только через каналы интересующего нас типа. Во-вторых, влияние последовательного сопротивления

может приводить к различию между истинным мембранным и поддерживаемым потенциалом. В-третьих, накопление ионов в примембранной области может вызывать зависящее от времени изменение тока через отдельные каналы. И, наконец, потенциал-зависимость проводимости открытого канала может быть ошибочно принята за потенциал-зависимость активации канала.